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超聲細菌分散計數儀助力結核桿菌藥敏試驗


一、背景介紹

結核分枝桿菌耐藥性的產(chǎn)生及其引起的耐藥結核病的流行,已經(jīng)成為國內外高度關(guān)注的嚴重影響結核病防治效果的問(wèn)題。開(kāi)展藥物敏感性試驗和耐藥性監測,對了解結核分枝桿菌的耐藥狀況、指導臨床治療、以及研究耐藥發(fā)生機制、有效控制耐藥結核病的流行具有非常重要的意義。

體外抗菌藥物敏感性試驗簡(jiǎn)稱(chēng)藥敏試驗(AST),是指在體外測定藥物抑菌或殺菌能力的試驗。藥敏實(shí)驗可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性,其目的是了解病原微生物對各種抗生素的敏感程度,以指導臨床合理選用抗生素藥物的微生物學(xué)試驗。

固體培養法這是目前結核病實(shí)驗室常用的細菌學(xué)藥敏試驗方法,包括比例法( method of proportion,MOP) 和絕對濃度法,分別由法國學(xué)者G.Canetti 和德國學(xué)者G.Meissner 于1963 年首先提出。比例法是世界衛生組織推薦的藥敏試驗方法,也是目前我國流行病學(xué)監測和耐多藥結核病規劃管理項目所采取的方法。比例法是將結核分枝桿菌菌液稀釋成不同的濃度,接種在相同濃度的含藥羅氏培養基上,通過(guò)計算耐藥菌的比例,來(lái)判斷細菌是否耐藥。

在我國,各省、直轄市、自治區疾病預防控制中心及胸科/傳染病醫院是開(kāi)展結核病研究和藥敏試驗的主要單位。收集培養的結核桿菌樣本,要進(jìn)行后續的藥敏試驗,細菌樣品的分散尤為關(guān)鍵。傳統方法通常是通過(guò)挑取培養的細菌進(jìn)行研磨分散,反復加液比濁,直至將所有的樣本均調節到同一麥氏濁度,然后進(jìn)行后續的藥敏試驗。

超聲細菌分散計數儀是一款基于超聲分散和光電濁度檢測原理的菌液前處理儀器。該儀器與傳統的手工分散方法相比,它能更快更好地實(shí)現菌落分散和濁度檢測一體化,同時(shí)智能提示稀釋到標準麥氏濁度菌懸液所需的稀釋體積。是一款高效率解放雙手的同時(shí)還不影響菌株活性和藥敏試驗結果的智能儀器,在微生物實(shí)驗前處理中具有較高的應用價(jià)值。


二、超聲分散處理結核桿菌的優(yōu)點(diǎn)


1. 工作原理

通過(guò)壓電陶瓷換能器將高頻電能轉化為超聲波聲能,由超聲波擊錘將超聲波聲能傳遞到比色皿,在不損傷樣品的前提下,實(shí)現比色皿中成團細菌的超聲波均勻分散,然后光源產(chǎn)生的光線(xiàn)透過(guò)比色皿照在傳感器上,通過(guò)傳感器讀取透射光的強度,將樣品與標準物質(zhì)對比,實(shí)現樣品麥氏濁度測量,并基于樣品麥氏濁度和算法給出稀釋到目標濁度所需加液體積,并對樣品菌落數進(jìn)行初步估計。


2. 菌液制備過(guò)程對比

序號超聲分散研磨瓶分散
1參數設置(0.5min)/
2

細菌挑?。?min)

細菌挑?。?min)
3超聲分散、比濁(1-3min)
漩渦震蕩、研磨(1-2min)
4菌液靜置,轉移到比濁管(15min)
5添加生理鹽水比濁(2min)
6根據稀釋體積提示添加生理鹽水(0.5min),制備出標準濁度菌懸液反復加液,比濁(2-5min),制備出標準濁度菌懸液
總耗時(shí)3-5min23-27min


3.分散效果對比



三、應用領(lǐng)域

1. 水處理、固液分散、溶液中顆粒的解團聚實(shí)驗;

2. 分枝桿菌、腸桿菌、葡萄球菌等微生物藥敏試驗的菌懸液制備;

3. 生物制品研發(fā)及細菌培養分散及濁度檢測實(shí)驗;

4. 食品微生物限度等檢測實(shí)驗。


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超聲細菌分散計數儀

參考文獻:

1.   穆成. 結核分枝桿菌藥敏試驗表型檢測法的新進(jìn)展[J]. 中國衛生檢驗雜志, 2015, 25(10):1678-1680.

2.    郭明日, 張麗霞. 非結核分枝桿菌病實(shí)驗室診斷技術(shù)及藥敏試驗研究進(jìn)展[J]. 淮海醫藥, 2017, 35(2): 246-249. 

3.    郭以河. MTT法體外藥敏試驗研究進(jìn)展及臨床應用[J]. 東南國防醫藥, 2005, 7(1): 77-78. 


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